AP標記的兔抗狗IgG

堿性磷酸酶（AP）用于標記抗體，常用戊二醛一步法，將酶和單抗混合，再加入適量戊二醛，使酶和抗體蛋白的NH2分別與兩個醛基結合，制備成結合物。該法簡便，但所得產物不均一，抗體活性損失大，酶標記率低。其程序如下：

1. 將5mg AP加入1ml抗體溶液（2mg/ml）中溶解，裝入透析袋，于4℃對0.01mol/L PH7.2 PBS透析18小時，換液三次。

2. 加入2.5%戊二醛20ul，室溫作用1-2小時，4℃對PBS透析過夜，其間換液三次。

3. 換用0.05mol/L PH8.0 Tris-HCl緩沖液透析，4℃過夜，換液三次。

4. 取出標記抗體，用含1%BSA的Tris-HCl緩沖液稀釋至4ml，即為AP標記物原液。

5. 每毫升中加入0.4ml甘油，小量分裝，保存備用。

實驗室操作注意事項：

1.實驗時根據試驗的情況和性質進行必要的防護。根據試驗可能發生的危險事故佩戴必要的防護工具，例如穿好試驗服，戴橡膠手套，防護面具，防毒面具等。實驗前，要注意清理試驗場周圍的安全隱患。檢查試驗裝置、藥品和相關物品是否有不符合要求的情況等。

2.遵循化學藥品的性質和化學反應的規律，不盲目蠻干和主觀臆測化學反應的過程。應根據化學反應的性質和過程選擇匹配的反應裝置，不可圖省事省去必要的安全措施。

3.經常估計到實驗的危險性

實驗事故雖不可預測，但其危險性的大小是可以估計到的。即使對不大了解的實驗，也必須推測其危險程度而制訂相應的預防措施。象下面這類實驗，必須十分注意。

①不了解的反應及操作;

②存在多種危險性的實驗(如發生火災、毒氣等);

③在嚴酷的反應條件(如高溫、高壓等)下進行的實驗。

4.充分作好發生事故時的預防措施并加以檢查。

平時注意熟悉需要關閉的主要龍頭、電氣開關，滅火器的位置及操作方法，避免發生事故時才四處尋找應急的物品。

5.實驗的后處理。實驗的后處理工作，亦屬實驗過程的組成部份。特別不可忽略回收溶劑和廢液、廢棄物等的處理。

AP標記的兔抗狗IgG