膠原酶NB4/Collagenase NB 4使用詳情

產(chǎn)品描述

膠原酶（Collagenase，CAS NO. 9001-12-1）是一種蛋白水解酶，常用來消化細胞外基質(zhì)蛋白。作為一種肽鏈內(nèi)切酶，膠原酶特異性識別Pro-X-Gly-Pro序列（高頻出現(xiàn)在膠原蛋白，很少在其他蛋白中發(fā)現(xiàn)）并切割氨基酸（X）和甘氨酸（Gly）之間的肽鍵。不同于其他蛋白酶，膠原酶是唯-一一種可識別并降解具三股超螺旋結(jié)構(gòu)的天然膠原纖維，這種膠原纖維廣泛存在結(jié)締組織中。

膠原酶NB4標(biāo)準(zhǔn)級別（Collagenase NB 4 Standard Grade），來源于溶組織梭菌（Clostridium histolyticum），是一種粗制的膠原酶，含有膠原溶解酶和其他酶活性包括梭菌蛋白酶和中性蛋白酶，這些酶比例的平衡確保溫和和有效的組織消化。本品膠原酶活性≥0.10 U/mg（PZ），適用于人和動物組織各種細胞的分離，組織類型包括：脂肪組織、軟骨、皮膚、胎盤、臍帶組織和肺，還適用于細胞傳代培養(yǎng)，比如胚胎干細胞。

保存與運輸方法

保存：2-8℃干燥保存，至少1年有效。

運輸：冰袋運輸。

使用方法

一、儲存液制備

膠原酶NB4標(biāo)準(zhǔn)級別溶于所有緩沖液（通常用于細胞分離）的濃度高達150mg/ml。酶溶液需連續(xù)放在冰上。由于膠原酶和一些二級蛋白酶依賴于Ca2+，因此建議在緩沖液內(nèi)加入≥2mM Ca2+，且完-全不能含鈣離子螯合劑（比如EDTA）。

重溶的膠原酶NB4溶液需經(jīng)0.22μm濾膜過濾除菌，按照單次用量分裝，并置于-20℃凍存。如果避免反復(fù)凍融，可穩(wěn)定保存1年。注意經(jīng)0.22μm濾膜建議選擇具低蛋白結(jié)合特性的膜（比如，醋酸纖維素，PVDF，或PES）。

二、工作液制備

用緩沖液稀釋儲存液到需要的膠原酶濃度，工作液需一直保存在冰上直到使用。

三、組織消化

對以下應(yīng)用的建議起始濃度：脂肪組織（人或鼠類）—0.2-0.3 PZ U/ml；軟骨（人或鼠類）—0.3-0.4 PZ U/ml；總的來說，具體膠原酶濃度取決于組織類型、來源和分離步驟。本膠原酶的最佳條件為37℃，pH 7.4。

四、失活和抑制劑

比如，通過降低反應(yīng)溫度或稀釋酶溶液能夠減低消化水平。

高pH能可逆失活膠原酶活性，低pH不可逆失活膠原酶活性。抑制劑包括半胱氨酸或螯合劑如EDTA。