植物組織直接PCR試劑盒檢測原理

產(chǎn)品用途

本試劑盒采用*的裂解緩沖液裂解組織(新鮮、凍存組織)，所得裂解物無需純化即可作為模板，用抗抑制的2×Super direct PCR Taq Mix進(jìn)行擴增，擴增產(chǎn)物可直接點樣電泳。

產(chǎn)品特點

· 直接以裂解物為模板進(jìn)行PCR，適用于樣品高通量篩選。

· 擴增片段<2 kb 。

適用范圍

非多糖、多酚植物。

操作步驟

請?zhí)崆皽?zhǔn)備95℃的水浴或金屬浴。

A：基因組DNA提取

1、取5 mg或0.5 cm2左右的植物組織樣品，剪碎后加入50µl Buffer P1，吹吸或渦旋混勻。（注意：切勿加入過量葉片組織，以便酶解反應(yīng)更順利進(jìn)行）。

2、95℃水浴或金屬浴孵育10分鐘。

3、加入50µl Buffer P2,混勻后直接作為模板進(jìn)行PCR或置于4℃或-20℃保存。

B：PCR擴增

注意事項

· 樣品避免反復(fù)凍融。

· 使用時試劑*化凍、混勻。

· 對于不易裂解組織(如蠟質(zhì)葉片)，可以延長95℃的孵育時間至30分鐘。

· 如擴增條帶較弱，可適當(dāng)增加模板用量或PCR循環(huán)數(shù)(不宜超過40個循環(huán))。

· 如非特異擴增較多，可調(diào)整退火溫度或適當(dāng)增減模板用量。

· 提取物4℃可保存三個月，-20℃可保存六個月（避免反復(fù)凍融）。